【PDF】分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法 - 醫(yī)學(xué)資源下載
資源作者：醫(yī)璐冇伱
資源分類：醫(yī)學(xué) - 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)
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上傳日期：2012-11-18 14:38:58

【pdf】分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法 全文目錄 第一章 質(zhì)粒的制備 一、培養(yǎng)基的制備 第一節(jié) 細(xì)菌的培養(yǎng)和保存 目錄 第二節(jié) 細(xì)菌感受態(tài)的制備和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 二、液體細(xì)菌培養(yǎng) 三、固體細(xì)菌培養(yǎng) 四、菌種的保存與復(fù)蘇 第三節(jié) 質(zhì)粒的提取和純化 二、細(xì)菌的轉(zhuǎn)化 一、感受態(tài)細(xì)胞的制備 一、質(zhì)粒的小量提取 二、質(zhì)粒的大量提?。▔A裂解法） 第二章 DNA的限制性內(nèi)切酶酶切技術(shù) 第一節(jié) 限制性內(nèi)切酶的特性和反應(yīng)條件 二、限制性內(nèi)切酶的命名 三、分類 一、限制性內(nèi)切酶的來源 六、限制酶的反應(yīng)條件 四、限制酶的特性 五、酶活力單位的定義及酶的貯存 第二節(jié) 限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用方法 二、大量酶解反應(yīng) 三、雙酶解反應(yīng) 一、小量酶解反應(yīng) 四、酶解產(chǎn)物的鑒定 第三章 DNA重組體的構(gòu)建 第一節(jié) DNA重組的方法 一、粘端連接法 二、平端連接法 三、平-粘連接法 第二節(jié) DNA重組反應(yīng) 二、平端連接反應(yīng)方法 三、定向連接反應(yīng) 一、粘端連接反應(yīng)方法 第三節(jié) 重組質(zhì)粒的鑒定 一、a互補(bǔ) 二、插入失活 三、菌落原位雜交 四、限制酶酶切分析 第四章 DNA序列測定 第一節(jié) Sanger雙脫氧鏈終止法的原理及試劑 二、試劑 一、原理 第二節(jié) 聚丙烯酰胺測序凝膠的制備 一、測序板的處理與安裝 第三節(jié) 測序樣品的制備反應(yīng)與高壓電泳 二、測序凝膠的灌制 一、應(yīng)用T7測序試劑盒的測序反應(yīng)方法 二、引物末端標(biāo)記法 第四節(jié) 測序凝膠的放射自顯影與序列的讀取 二、DNA序列的讀取 一、放射自顯影 第五章 核酸探針的制備和標(biāo)記 第一節(jié) 核酸探針的基本概念和種類 二、探針的種類及選擇 三、各類標(biāo)記物及選擇 一、基本概念 第二節(jié) DNA探針的制備和標(biāo)記 一、切口平移法 二、隨機(jī)引物法 三、單鏈DNA探針的制備和標(biāo)記 四、DNA探針的末端標(biāo)記 第三節(jié) RNA探針的制備和標(biāo)記 一、SP6/T7RNA聚合酶體外轉(zhuǎn)錄的原理 二、RNA探針制備方法 第四節(jié) 寡核苷酸探針的制備和標(biāo)記 第五節(jié) 探針的純化和比放射性活性測定 一、探針的純化 第六節(jié) 非同位素法標(biāo)記核酸探針 二、探針的比放射性活性測定 一、地高辛標(biāo)記法 二、光敏生物素法 第六章 DNA的凝膠電泳 第一節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳 一、瓊脂糖凝膠的性質(zhì) 二、電泳裝置 三、電泳緩沖液 四、凝膠濃度的選擇 五、常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳 六、堿性瓊脂糖凝膠電泳 第二節(jié) 聚丙烯酰胺凝膠DNA電泳 一、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 二、變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 第三節(jié) 從凝膠中回收和純化DNA 一、DNA的回收 二、回收DNA的純化（DEAE-sephacel柱層析法） 第七章 真核細(xì)胞總RNA的制備與分析 第一節(jié) RNA的制備 一、培養(yǎng)細(xì)胞總RNA制備 二、組織RNA的制備（并硫氰酰胍法） 三、Poly(A)+RNA的純化（寡聚dT）纖維素純化mRNA 四、分級分離RNA 第二節(jié) RNA的分析 一、NorthernBlot雜交 二、RNA的狹線雜交 第八章 細(xì)胞及組織DNA的制備和SouthernBlot分析 第一節(jié) 真核基因組DNA的制備 一、細(xì)胞基因組DNA的提取 二、組織細(xì)胞基因組DNA的提取 三、DNA的純化、定量和濃縮 第二節(jié) DNA印跡轉(zhuǎn)移雜交技術(shù) 一、瓊脂糖凝膠電泳分離基因組DNA限制性酶切片段 二、DNA的轉(zhuǎn)移與固定 三、預(yù)雜交和雜交 第三節(jié) 放射自顯影和顯色反應(yīng) 一、放射自顯影 二、非同位素探針雜交的檢測 第九章 克隆化基因的表達(dá)與蛋白產(chǎn)物的檢測 第一節(jié) 原核表達(dá)系統(tǒng)的理論基礎(chǔ) 一、原核細(xì)胞的分子生物學(xué)特點(diǎn)及表達(dá)調(diào)控因素 二、外源基因的克隆與重組 三、外源基因的蛋白表達(dá)方式 第二節(jié) 克隆化基因產(chǎn)物的檢測與分析 二、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白純化 一、外源基因的誘導(dǎo)表達(dá) 三、蛋白質(zhì)的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù) 四、Western印跡法檢測表達(dá)蛋白 第十章 生長因子的常用檢測方法 第一節(jié) 生長因子的定性檢測 第二節(jié) 生長因子的定量檢測 一、免疫沉淀法檢測表達(dá)蛋白 二、ELISA法 第三節(jié) 生長因子活性檢測 二、MTT比色法 一、3H-TdR摻入法 第十一章 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù) 第一節(jié) PCR的原理與基本操作 二、基本操作 一、PCR的原理 第二節(jié) PCR反應(yīng)體系中的各種組分 一、引物 二、DNA聚合酶 三、PCR反應(yīng)緩沖液 第三節(jié) PCR反應(yīng)模板的制備 二、全血標(biāo)本DNA制備 四、dNTPs 一、細(xì)菌DNA的制備 三、從白細(xì)胞中制備DNA 四、臨床拭子標(biāo)本DNA的提取 五、固定和包埋的組織標(biāo)本DNA提取 八、RNA標(biāo)本的制備 六、絨毛及羊水細(xì)胞DNA的提取 七、由微量及特殊標(biāo)本中制備染色體DNA 第四節(jié) PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化 一、溫度循環(huán)參數(shù) 二、PCR產(chǎn)物積累規(guī)律 三、手工操作和自動化 四、預(yù)防假陽性結(jié)果 第五節(jié) PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的分析 一、凝膠電泳分析法 二、點(diǎn)雜交 三、微孔板雜交法 第六節(jié) PCR相關(guān)技術(shù)及其應(yīng)用 四、PCR-ELISA法 一、PCR引物的5’端修飾 二、應(yīng)用PCR制備探針 三、PCR克隆 四、原位PCR 五、逆轉(zhuǎn)錄PCR 六、其它幾種PCR相關(guān)技術(shù) 第十二章 原位雜交技術(shù) 第一節(jié) 原位雜交技術(shù)基礎(chǔ)程序 一、玻片的預(yù)處理 二、組織取材與固定劑的選擇 三、組織切片的處理 四、雜交反應(yīng) 五、雜交后處理 六、雜交體的檢測 七、對照實(shí)驗(yàn)和ISHH結(jié)果的判斷 八、原位雜交基本操作步驟 第二節(jié) 組織細(xì)胞原位雜交技術(shù) 一、細(xì)胞和組織片制作 二、預(yù)雜交和雜交 三、雜交后處理 四、顯示系統(tǒng) 第三節(jié) 染色體原位雜交技術(shù) 一、染色體的制備 二、原位雜交 三、信號檢測 四、顯帶復(fù)制 第四節(jié) 原位雜交結(jié)合免疫組織化學(xué)技術(shù) 二、非同位素原位雜交與免疫組化聯(lián)合法 一、同位素原位雜交與免疫組化PAP法聯(lián)合程序 第五節(jié) 雙重標(biāo)記原位雜交技術(shù) 二、結(jié)合放射性同位素和非放射性標(biāo)記探針的雙重標(biāo)記原位雜交 一、兩種同位素標(biāo)記探針的雙重標(biāo)記原位雜交 三、非放射性標(biāo)記探針的雙重標(biāo)記原位雜交 第六節(jié) 電鏡原位雜交技術(shù) 第七節(jié) PCR與原位雜交細(xì)胞化學(xué)結(jié)合法 第八節(jié) 原位引物延伸標(biāo)記法 第十三章 真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染技術(shù) 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù) 一、培養(yǎng)基制備 第二節(jié) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法 二、細(xì)胞凍存 三、細(xì)胞復(fù)蘇 一、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的制備 二、磷酸鈣介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法 三、DEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法 四、電擊基因?qū)敕? 五、脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法 第三節(jié) 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選 一、G418篩選 二、克隆細(xì)胞株的轉(zhuǎn)移與擴(kuò)增 第十四章 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的包裝與克隆篩選 第一節(jié) 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的包裝 一、包裝細(xì)胞的來源與特性 二、目的基因的導(dǎo)入與包裝 三、重組逆轉(zhuǎn)錄病毒液的制備 第二節(jié) 病毒滴度的測定 二、病毒滴度測定與計算 四、病毒液的濃縮與保存 一、NIH3T3細(xì)胞的培養(yǎng)與準(zhǔn)備 第三節(jié) 野生型病毒的檢測 二、RT-PCR檢測 三、S+/L-檢測法 四、neo基因及β-半乳糖苷酶（β-gal）互補(bǔ)分析法 一、PCR檢測 第四節(jié) 逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的體外基因轉(zhuǎn)移方法 二、常用靶細(xì)胞 一、靶細(xì)胞的選擇條件 三、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞的分離和培養(yǎng) 四、病毒感染靶細(xì)胞 第十五章 程序化細(xì)胞死亡常用研究方法 第一節(jié) 基本概念 一、PCD的形態(tài)學(xué)特征 二、PCD的生化特性 第二節(jié) 形態(tài)學(xué)觀察方法 一、普通光鏡觀察方法 二、活細(xì)胞懸液熒光染色法 附：超薄切片常規(guī)光鏡觀察制備方法 三、透射電鏡觀察法 第三節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳法 一、常規(guī)法 第四節(jié) 流式細(xì)胞儀觀察法 二、快速法 一、PI染色法 二、Hoechst-PI染色方法 第五節(jié) 末端標(biāo)記法 一、簡易末端標(biāo)記法 二、5’末端32P標(biāo)記法 三、原位末端標(biāo)記法 第十六章 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器的使用方法與保養(yǎng) 第一節(jié) PCR擴(kuò)增儀 第二節(jié) 冷凍離心機(jī) 第三節(jié) 紫外檢測儀 第四節(jié) 數(shù)字式酸度計 第五節(jié) 分光光度計 第六節(jié) 電泳儀 第七節(jié) 分析天平 附錄二常用緩沖液和儲存液的濃度及配制方法 附錄一常用實(shí)驗(yàn)用品的處理 附錄三常用試劑的配制 附錄四常用單位的換算 附錄五常用的同位素及標(biāo)記化合物 附錄六放射性自顯影試劑、器材及檢測 附錄七國內(nèi)主要生物技術(shù)公司及試驗(yàn)儀器生產(chǎn)廠家

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