在梅毒的診斷治療中，梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果起到了很重要的作用，具有決定性的意義，下面就梅毒的檢測(cè)方法做一個(gè)簡(jiǎn)單的介紹。

一、梅毒常用的檢測(cè)方法

梅毒一般常用的檢測(cè)方法是兩種：病原學(xué)檢測(cè)，血清學(xué)檢測(cè)。

兩種方法檢測(cè)的標(biāo)志物不同，病原學(xué)檢測(cè)的直接檢測(cè)梅毒螺旋體，而血清學(xué)檢測(cè)是檢測(cè)血液或者組織液中的梅毒抗體；兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，針對(duì)不同的感染情況，采用最合適的檢測(cè)方法，就能夠起到及時(shí)診斷治療，對(duì)治療的時(shí)機(jī)和效果有著重要的意義。

二、病原學(xué)檢測(cè)

病原學(xué)檢測(cè)是直接檢測(cè)組織液中的梅毒螺旋體，是一種小而纖細(xì)的螺旋狀微生物，因其透明不易染色，故稱(chēng)為蒼白螺旋體，長(zhǎng)度為8μm～20μm，平均8μm～10μm，直徑<0.2μm,有6～12個(gè)螺旋。

梅毒螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，也通過(guò)羊膜穿刺術(shù)獲得孕婦的羊水作暗視野顯微鏡檢查，對(duì)先天梅毒具有診斷價(jià)值。

原理：一期、二期梅毒時(shí)，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)主要有幾種方法：暗視顯微鏡檢查，鍍銀染色法，直接熒光法。用暗視野檢查法檢查病損內(nèi)的梅毒螺旋體，這是一種最可靠的簡(jiǎn)單而常用的方法；免疫熒光檢查法是一種可區(qū)別病損中的螺旋體是梅毒螺旋體或其他非致病螺旋體的方法，此法同樣具有特異性；而銀染色法是一種可顯示內(nèi)臟器官及皮膚損害中螺旋體的方法，但腐生螺旋體也可染色，因此是非特異性染色法。一般常用的是采用暗視顯微鏡檢查。

暗視野映光檢查是采用一個(gè)特殊的聚光器，中央為黑漆所遮蔽，光線只可從其圓周邊緣斜射到載玻片上。倘若斜射光線遇到載玻片上的物體，如螺旋體等，由于菌體和周?chē)后w折光率不同，引起散射的光線可通過(guò)鏡筒達(dá)到觀察者。因此，物體在暗視野內(nèi)發(fā)光顯現(xiàn)。

暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色和熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體等檢查方法，直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。暗視野顯微鏡檢查已被世界衛(wèi)生組織指定為性病實(shí)驗(yàn)室必備項(xiàng)目之一。

螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，對(duì)于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。

但如未檢測(cè)出梅毒螺旋體，也并不能排除患梅毒的可能性，可能是由取材不當(dāng)或皮損處螺旋體數(shù)量不足，或患者使用過(guò)抗菌素，損害已接近自然消退等原因引起?？勺尰颊邚?fù)查及進(jìn)行血清學(xué)檢查。。

三、血清學(xué)檢測(cè)

梅毒的血清學(xué)檢測(cè)是梅毒診斷和抗生素治療后療效評(píng)估的主要手段，目前大部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)基本上都是采用此種方法對(duì)梅毒進(jìn)行診斷治療。
梅毒的抗體檢測(cè)分為非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)兩種。

1、非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：主要有性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL），不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(USR)，快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）。

試驗(yàn)的原理：梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對(duì)螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類(lèi)脂抗原的抗體（非特異性抗體），試驗(yàn)試劑的基本成分是心磷脂、卵磷脂和膽固醇，抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見(jiàn)。
VDSL：二十世紀(jì)50、60年代最為常用的梅毒血清學(xué)試驗(yàn)，所用的抗原是從牛心中提取的心磷脂和從雞蛋黃中提取的卵磷脂及膽固醇等有效成分，梅毒螺旋體在破壞機(jī)體組織的過(guò)程中，體內(nèi)釋放一種心磷脂抗原，這種抗原可**機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體即反應(yīng)素，其與牛心中提取的心磷脂在體外可產(chǎn)生免疫結(jié)合反應(yīng)，試驗(yàn)中所用的卵磷脂的作用是加強(qiáng)心磷脂的抗原性，膽固醇可增強(qiáng)抗原的敏感性。

此方法是唯一推薦檢測(cè)腦脊液反應(yīng)素的方法，用于神經(jīng)梅毒腦脊液檢測(cè)特異性高，檢測(cè)陽(yáng)性可以作為神經(jīng)梅毒確診依據(jù)，但敏感性較低，即檢測(cè)陰性不能排除神經(jīng)梅毒。

此試驗(yàn)有幾個(gè)明顯的缺點(diǎn)，抗原需要每天配制；血清標(biāo)本要加熱滅活處理；需在顯微鏡下觀察結(jié)果。因此，后來(lái)又推出了改良的USR和RPR等方法。

USR：對(duì)VDRL抗原進(jìn)行了改良，其將VDRL抗原用稀釋液稀釋后，再將該抗原懸液離心，然后在沉淀物中加入含有EDTA-Na2、氯化膽堿和防腐劑的一定量的緩沖液，EDTA可使抗原半年內(nèi)不變性，氯化膽堿對(duì)補(bǔ)體有化學(xué)滅活作用，從而使用時(shí)無(wú)需每天配制抗原及血清加熱滅活處理。

RPR:是在上述USR抗原的基礎(chǔ)上加入一定量特制的活性炭顆粒，實(shí)驗(yàn)在特制的白色紙片卡上進(jìn)行，從而使得抗原抗體反應(yīng)在白色底板上出現(xiàn)黑色的凝集顆粒而可用肉眼觀察，結(jié)果容易判斷,直接用肉眼而不需要用顯微鏡觀測(cè)結(jié)果。

TRUST：該方法是在抗原試劑中加入特制的染料甲苯胺紅,由于甲苯胺紅是化學(xué)染料，顆粒均勻，生產(chǎn)的批間差異小，結(jié)果易于觀察。

TRUST是目前最為常用的梅毒篩查方法。

臨床意義：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、快速、敏感性和特異性較好，可作為梅毒篩查試驗(yàn)。因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征；結(jié)合梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)，可以鑒別梅毒現(xiàn)癥感染和既往感染。

幾種方法的敏感性和特異性都基本相似。

非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)敏感性和特異性
2、梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：常用的主要有梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)，梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)，梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA），還有如梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(cè)(RT)，熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS），梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）。

TPHA：所用抗原為將梅毒螺旋體Nichols株經(jīng)超聲破碎后得到的可溶性抗原成分，用其致敏紅細(xì)胞。同時(shí)用Reiter株制成吸收劑稀釋血清，可將血清中的非特異性抗體吸收掉，以加強(qiáng)測(cè)定的特異性。

TPPA:測(cè)定原理基本上與TPHA類(lèi)同，所不同的是TPPA所用的凝集顆粒為明膠，而非TPHA中的紅細(xì)胞。用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒與血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異，是目前公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。

TPPA試驗(yàn)原理示意圖
ELISA:采用雙抗原夾心ELISA法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性IgM和IgG抗體。將高純度的特異抗原(通常含相對(duì)分子質(zhì)量為5500、17000、44500、47000的蛋白質(zhì))包被于微孔反應(yīng)板(條),待測(cè)血清中如存在抗TP抗體，即可與之結(jié)合。再加人酶標(biāo)記的高純度抗原，在固相上形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，待加人酶底物/色原(過(guò)氧化服ITMB)液時(shí)即產(chǎn)生呈色反應(yīng)，用酶聯(lián)檢測(cè)儀判定試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng),呈色強(qiáng)度與抗體水平成正比。

本法可用于大樣本血清檢測(cè),適用于自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng),是目前梅毒篩查的較好方法。

ELISA試驗(yàn)原理示意圖
近年出現(xiàn)采用基因工程重組表達(dá)的特異性梅毒螺旋體抗原包被固相板，使試驗(yàn)更具有敏感性和特異性，具有簡(jiǎn)單、快速和高通量的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)是梅毒血清學(xué)診斷試驗(yàn)的首選方法，但在工作中常出現(xiàn)假陽(yáng)性的問(wèn)題,而大多數(shù)是由于弱陽(yáng)性反應(yīng)引起的。

CLIA：原來(lái)與ELISA相同，是在ELISA技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)，以多種梅毒螺旋體特異性蛋白(TpN15、TpN17和TpN47)為固相抗原，并用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記同種蛋白為標(biāo)記抗原，與患者血清中的梅毒螺旋體抗體形成雙抗原夾心復(fù)合物，經(jīng)洗滌，加入底物(發(fā)光劑)，根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度(RLU)來(lái)判斷患者血清中是否含有梅毒螺旋體特異性抗體。近年來(lái)推出的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光法，具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，且敏感性、特異性與其他常用方法結(jié)果相符合。

是放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）與酶聯(lián)免疫分析（Enzymeimmunoassay，EIA）的結(jié)合，采用雙抗夾心法的原理，使用化學(xué)發(fā)光底物取代傳統(tǒng)的顯色底物，增加了檢測(cè)的靈敏度。

CLIA試驗(yàn)原理示意圖
RT：一般常用的多是膠體金免疫層析(GICA)，是20世紀(jì)90年代初建立的一種簡(jiǎn)易快速穩(wěn)定的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，是使用膠體金作為標(biāo)記物的一種固相膜免疫測(cè)定方法。采用純化重組基因的梅毒抗原包被膜條測(cè)試區(qū)，加入待測(cè)血清后，血清中的抗體與膜條上金標(biāo)記抗人IgG或抗IgM反應(yīng)，然后通過(guò)毛細(xì)管效應(yīng)層折至測(cè)試區(qū)與包被的特異抗原結(jié)合，在測(cè)試區(qū)出現(xiàn)紫紅色條帶為陽(yáng)性。該法簡(jiǎn)便、快速，不需要特殊的儀器，適合于單人份操作，也適用于較緊急的場(chǎng)合。

有全血和血清、血漿法

全血法：
血清、血漿法：
FTA-ABS：方法是將梅毒螺旋體Nichols株抗原直接涂在載玻片上，然后將密螺旋體無(wú)毒株（Reiter株）制成吸收劑加至待測(cè)血清標(biāo)本中反應(yīng)30分鐘，以去除同屬抗原的交叉反應(yīng)。再將吸收后的血清加到玻片的抗原膜上，37℃溫育30分鐘，用PBS緩沖液沖洗晾干，再加熒光素標(biāo)記的抗人IgG，37℃溫育后沖洗，晾干，最后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。

本試驗(yàn)由于吸收試劑的使用，提高了測(cè)定的特異性，可達(dá)92%。由于使用的是梅毒螺旋體Nichols株抗原，密螺旋體各種抗原分子均存在，提高了試驗(yàn)的敏感性，對(duì)一期梅毒的敏感80%，二期為99-100%，三期為95-100%。

FTA-ABS的結(jié)果觀察
WB：將梅毒螺旋體Nichols株菌體細(xì)胞破碎，使用凝膠電泳將梅毒螺旋體各種抗原成分轉(zhuǎn)印到膜條上作為固相，膜條與待測(cè)血清和酶標(biāo)抗體孵育,底物顯色后,當(dāng)血清中存在梅毒特異性抗體時(shí),則在印跡膜上相應(yīng)的特異性多肽抗原位置出現(xiàn)顯色條帶。

WB的試驗(yàn)結(jié)果：
四、兩種血清學(xué)檢測(cè)方法的比較

非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：1、非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)陽(yáng)性的患者往往是梅毒現(xiàn)癥感染者，臨床上即可開(kāi)展治療。2、非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)可以作為療效觀察的指標(biāo)。3、此類(lèi)方法價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)便。

缺點(diǎn)：1、特異性：由于在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、結(jié)締組織病、靜脈***者以及孕婦中均可出現(xiàn)反應(yīng)素，所以此類(lèi)試驗(yàn)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。2、敏感性：約1%-2%的二期梅毒病人出現(xiàn)前帶反應(yīng)現(xiàn)象導(dǎo)致結(jié)果假陰性。此外，由于反應(yīng)素出現(xiàn)的時(shí)間晚于特異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒或經(jīng)過(guò)治療后反應(yīng)素可能轉(zhuǎn)陰，這類(lèi)試驗(yàn)對(duì)隱性梅毒也不敏感，因此，用此類(lèi)試驗(yàn)進(jìn)行梅毒篩查時(shí)，存在相當(dāng)數(shù)量的漏檢。

特異性梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：具有較高的敏感性和特異性。

缺點(diǎn):成本較高，操作相對(duì)復(fù)雜，不能作為療效觀察指標(biāo)，不能絕對(duì)排除假陽(yáng)性。

正是由于各自有著不同的優(yōu)缺點(diǎn)，所以對(duì)于梅毒的診斷治療，一般都同時(shí)用兩種方法進(jìn)行檢測(cè)。