一、原理

    肺炎支原體快速檢測卡可檢測血清中的肺炎支原體lgM抗體?；颊叩难鍢悠贩謩e加入兩個測試孔內，當樣品沿膜擴散時，分別加入3滴抗人lgM堿性磷酸酶復合物、3滴洗液和2滴底物，5分鐘后觀察結果。質控孔為質量控制，固定有人lgM，測試孔固定有肺炎支原體抗原。陽性反應結果為藍色，陰性結果為無色。

    二、材料

    1、患者血清。

    2、肺炎支原體lgM檢測試劑盒，包括：

    （1）檢測卡：單獨錫紙包裝，卡上固定有肺炎支原體抗原或人lgM（質控孔）。

    （2）陽性質控液（1.7ml）：含有人抗肺炎支原體lgM的0.1%疊氮鈉緩沖液。

    （3）陰性質控液（1.7ml）：0.1%疊氮鈉緩沖液。

    （4）酶結合物：（11ml）：含有以堿性磷酸酶標記的抗人lgM單克隆抗體的0.1%疊氮鈉緩沖液。

    （5）洗液：9.5%（W/V）的呱基氫氯酸。

    （6）底物（15ml）：含有5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸的0.1%疊氮鈉的緩沖液。

    （7）移液管。

    三、樣本處理

    血清樣品2—8℃可保存3天，如果不能在此期間測試，-20℃保存，樣品不宜反復凍融。

    四、操作

    1、從冰箱中取出試劑盒，置室溫平衡20分鐘。

    2、從錫紙袋中取出檢測卡，作好標記。

    3、用移液管滴加2滴血清到卡下端兩個測試孔中。

    4、22—25℃下孵育2分鐘。2分鐘內血清應沿膜擴散至上端的測試孔中。

    5、加入3滴酶結合物到下端兩個測試孔中，22—25℃下孵育2分鐘，酶結合物應沿膜擴散至上端的測試孔中。

    6、加入3滴洗液到上端兩個測試孔中，等待完全吸收。

    7、滴加2滴底物試劑到上端兩個測試孔，22—25℃下孵育5分鐘，5分鐘后立即觀察反應結果。

    五、結果

    根據(jù)上端兩個反應孔的反應結果判斷：

    陽性結果：上端兩孔都出現(xiàn)藍色。提示肺炎支原體性lgM存在。

    陰性結果：質控孔出現(xiàn)藍色或輕微藍色，測試孔無色或呈暗灰色，提示不存在肺炎支原體lgM或其濃度在檢測下限之下。

    無效反應：質控孔不出現(xiàn)藍色。產生無效反應的可能原因為：試劑或檢測卡質量問題，操作不當，樣品擴散不好，酶結合物嚴重污染，血清中含有過多脂質成分等。無污染血清可離心后再次測試 。

    六、特異性

    該試劑盒與下列因素不發(fā)生交叉反應：腺病毒、風濕因子、呼吸道合胞病毒、抗核抗體、流感病毒A型和B型、副流感病毒3型、組織胞漿菌、巨細胞病毒等。