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塑料包埋制片技術(shù)

2012-08-27 09:35 閱讀:5947 來(lái)源:愛(ài)愛(ài)醫(yī) 責(zé)任編輯:潘樂(lè)樂(lè)
[導(dǎo)讀] 用塑料包埋切片能制備高質(zhì)量的組織切片,與石蠟切片相比,具有細(xì)胞收縮小、結(jié)構(gòu)清晰、分辨力高等優(yōu)點(diǎn),但由于操作復(fù)雜,費(fèi)時(shí)又費(fèi)刀,故除骨髓等有特殊要求的切片外,很少會(huì)有人使用此方法。 1、取材:要求修成2mm厚的薄片。 2、固定:10%中性福馬林或Bouin's

    用塑料包埋切片能制備高質(zhì)量的組織切片,與石蠟切片相比,具有細(xì)胞收縮小、結(jié)構(gòu)清晰、分辨力高等優(yōu)點(diǎn),但由于操作復(fù)雜,費(fèi)時(shí)又費(fèi)刀,故除骨髓等有特殊要求的切片外,很少會(huì)有人使用此方法。

    1、取材:要求修成2mm厚的薄片。

    2、固定:10%中性福馬林或Bouin's液。根據(jù)標(biāo)本大小固定時(shí)間為:2~4小時(shí)不等。

    3、脫水:組織塊脫水用梯度酒精(80%、95%Ⅰ、95%Ⅱ、100%Ⅰ、100%Ⅱ)。較大的組織(10x15x2mm)每步30~60分鐘;中等組織(5x5x2mm),每步15~20分鐘;小組織(3x3x2mm),可不脫水,直接入浸透液。骨髓組織可用5%硝酸脫鈣,或不脫鈣直接脫水、包埋。脫水時(shí)間比同樣大小的組織長(zhǎng)2~3倍。

    4、浸透:取甲基丙烯酸-2-羥基乙基酯(HEMA)95ml,聚乙二醇(PEG-400)8ml,過(guò)氧化苯甲酰0.7g,混勻溶解后置于棕色瓶,4℃?zhèn)溆谩=笗r(shí)間為24~48小時(shí),其間更換一次浸透液。

    5、包埋:A液:即浸透液。B液:PEG-40020Nml,N-N二甲基苯胺1ml混合,搖勻溶解后置于棕色瓶,4℃?zhèn)溆?。包埋劑必須在使用前配制,按A、B二液以100:3的比例混合,稍加攪拌便可使用。經(jīng)浸透的組織塊置于塑料模具內(nèi),注入包埋劑,放置30~60分鐘(室溫高于18℃可放置于冰箱中),待包埋劑完全滲入組織后,在包埋模具上加蓋,在室溫中放置,使其聚合,成型后便可切片。

    6、切片:先用鋼銼修整聚合塊,四周盡量修至靠近組織,表面修至組織完全暴露,用常規(guī)石蠟切片機(jī)切片。切片厚度可切1~2цm。

    7、展片與烤片:用40~42℃水溫展片,撈至趕緊載玻片,60~80℃的溫箱烤片1小時(shí)左右。

    8、染色與封片:塑料切片染色前不必脫去包埋劑,直接染色。蘇木素3分鐘,水洗,鹽酸酒精分化1~2秒鐘,水洗,溫水藍(lán)化,伊紅2-5秒鐘,水洗,吹干后中性樹(shù)膠封固。


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