近年來的研究發(fā)現(xiàn)，人腎小球足細(xì)胞膜上表達(dá)的M型磷脂酶2 受體（M?type phospholipase A2 receptor，M-typePLA2R）是特發(fā)性膜性腎?。╥diopathic membranous nephropathy，IMN）的主要自身抗原，70%～82%的IMN 患者體內(nèi)相應(yīng)的抗磷脂酶2受體抗體（Anti-PLA2R antibody）是其主要自身抗體。

　　已有的研究證明M 型磷脂酶2 受體與抗磷脂酶2 受體抗體在腎小球足細(xì)胞膜上共表達(dá)。磷脂酶A2（Phospholipase A2，PLA2）家族參與人體內(nèi)多種代謝功能，部分PLA2是PLA2R的天然配體。我們就近年來M型PLA2R及其配體和抗體與特發(fā)性膜性腎病研究進(jìn)展作一綜述。

　　一、PLA2及PLA2R介紹

　　磷脂酶A2 是一組酶系，廣泛存在于人體各組織器官中。包括分泌型磷脂酶A2（secreted PLA2,sPLA2）,細(xì)胞質(zhì)型磷脂酶A2（cytosolic PLA2,cPLA2）及非鈣依賴型磷脂酶A2（Ca2+?inde pendent PLA2,iPLA2）3 大類。

　　每一類又包括多種亞型，如sPLA2 包括11 種亞型(IB, IIA, IIC, IID, IIE,IIF, III, V, X, XIIA 及XIIB)；cPLA2 包括6 種亞型(IVA,IVB,IVC,IVD,IVE, IVF)；而iPLA2 包括9 種亞型(VIA, VIB,PNPLA6, PNPLA7, PNPLA3, PNPLA2, PNPLA4, PNPLA5,PNPLA1)。

　　各種PLA2均有不同的體內(nèi)分布及功能，但他們都有一個(gè)基本的功能，即水解甘油磷脂sn-2 鍵。其中在自體細(xì)胞膜水解中以cPLA2 起主要作用。sPLA2 除酶解作用外，還有其他多種效應(yīng)，這些效應(yīng)包括細(xì)胞增殖、遷移、激素釋放、脂質(zhì)介質(zhì)產(chǎn)生及細(xì)胞因子的產(chǎn)生、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等。這些效應(yīng)是sPLA2 通過與PLA2R 結(jié)合實(shí)現(xiàn)的。

　　PLA2R 包括N 型及M 型。N 型PLA2R 最初是在大鼠腦組織中被發(fā)現(xiàn)的，另一種受體是M型PLA2R，最先是在兔子骨骼肌中被發(fā)現(xiàn)的。從眼鏡蛇毒中分離出來的神經(jīng)性毒素OS2，即一種sPLA2對(duì)兩者都具有高親和力。人體腎臟組織中表達(dá)M 型PLA2R。M 型PLA2R 結(jié)構(gòu)示意圖如圖1。

　　M 型PLA2R 屬于C 型外源性凝集素超家族??甘露糖受體家族的一員，是I型跨膜蛋白，包含較長的胞外段、跨膜段及較短的胞內(nèi)段。胞外段包含N 末端的胱氨酸富集部分、II型纖維連接蛋白部分及八個(gè)串聯(lián)的C型外源性凝集素樣部分（CRD）。

　　PLA2R 細(xì)胞外結(jié)構(gòu)中結(jié)合sPLA2的關(guān)鍵部位是CRD5[5]。sPLA2中以sPLA2?IB研究得較為深入。sPLA2?IB（因?yàn)樵谝认僦写罅看嬖冢╅L久以來被認(rèn)為是一種消化酶。PLA2R 的發(fā)現(xiàn)拓展了我們對(duì)sPLA2?IB 的概念。

　　sPLA2?IB對(duì)PLA2R具有高度特異性親和力,除消化功能外，sPLA2?IB與其受體結(jié)合后執(zhí)行多種生物功能，包括細(xì)胞增殖、脂肪介質(zhì)的釋放等等。

　　研究發(fā)現(xiàn)PLA2R敲除的小鼠中內(nèi)毒素休克病情減輕，而PLA2R 在內(nèi)毒素休克進(jìn)程中的促炎癥介質(zhì)釋放功能起著關(guān)鍵作用。經(jīng)sPLA2-IB 處理后的大鼠腎小球系膜細(xì)胞導(dǎo)致sPLA2-IIA 和環(huán)氧化酶-2（COX-2）表達(dá)增加，可能原因是sPLA2?IB 與其特異性M 型PLA2R 結(jié)合所致。sPLA2-IB在MMP的產(chǎn)生中也有重要作用。

　　既往的研究揭示花生四烯酸（arachidonic acid,AA）介導(dǎo)的代謝在調(diào)節(jié)MMP表達(dá)及腫瘤擴(kuò)散中起作用,提示PLA2在產(chǎn)生AA酶過程中也有一席之地。

　　人纖維肉瘤細(xì)胞表達(dá)sPLA2 IB, IIA 及V，同時(shí)也表達(dá)M 型PLA2R，經(jīng)細(xì)胞外sPLA2 阻滯劑處理后的腫瘤細(xì)胞侵襲性減輕且MMP-2/9 生成減少。

　　給予纖維肉瘤細(xì)胞增加外源性sPLA2?IB可顯著提高M(jìn)MP?2/9生成。在HT-1080細(xì)胞中AA及油酸呈時(shí)間依賴性的分泌增加。這一效應(yīng)是受體介導(dǎo)的，而非其脂解效應(yīng)。

　　二、sPLA2與M型PLA2R間的調(diào)節(jié)機(jī)制

　　I型sPLA2通過特異性PLA2R調(diào)節(jié)前列腺素類物質(zhì)的生物合成而不是其自身的酶解活性，這在成骨細(xì)胞中已經(jīng)得到證實(shí)。其機(jī)制為誘導(dǎo)COX-2 的產(chǎn)生，而后者誘導(dǎo)產(chǎn)生前列腺素（PGE）。

　　可能是sPLA2 先水解細(xì)胞膜產(chǎn)生AA，AA 進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核膜周圍有COX?1 及COX-2 存在，后者可作用于AA 而產(chǎn)生PGE。

　　也有認(rèn)為sPLA2通過激活cPLA2使其磷酸化后產(chǎn)生酶解活性，水解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜或核膜產(chǎn)生AA，后者再通過COX-1或COX-2途徑產(chǎn)生PGE。肥大細(xì)胞中sPLA2-II通過細(xì)胞表面受體調(diào)控AA的釋放，導(dǎo)致cPLA2 的激活。其機(jī)制可能是激活了包括PKC/Raf-1/MAPK在內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。

　　此外，在大鼠纖維細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)cPLA2 及其下游的12-或15-脂氧合酶途徑能增強(qiáng)sPLA2?II基因的表達(dá)。在人胚胎腎細(xì)胞中，細(xì)胞因子**產(chǎn)生的cPLA2 導(dǎo)致的AA 使細(xì)胞膜失去穩(wěn)態(tài)而使其更容易被sPLA2-II 水解。

　　本課題組前期研究已證實(shí)培養(yǎng)的人足細(xì)胞可表達(dá)M 型PLA2R，血管緊張素II **后會(huì)導(dǎo)致足細(xì)胞nephrin 蛋白表達(dá)變化及足細(xì)胞凋亡。證明了在小鼠足細(xì)胞中醛固酮可通過PI3/Akt 及P38MAPK信號(hào)通路導(dǎo)致足細(xì)胞凋亡。

　　雖然sPLA2抑制劑如吲哚類似物Indoxam在一些疾病模型中可阻斷sPLA2 與其受體結(jié)合后的效應(yīng)并揭示其潛在的治療效果，但由于將sPLA2 的侵襲性及防御性效應(yīng)均阻斷了，因此在阻止其促炎性反應(yīng)效應(yīng)的同時(shí)也抵消了其治療作用。由于sPLA2的水解作用，sPLA2對(duì)外來細(xì)菌及真菌有殺傷作用。

　　如sPLA2?IIA 能直接降解細(xì)菌胞膜而有效的殺傷細(xì)菌，sPLA2?V則能促進(jìn)巨噬細(xì)胞提升其抗真菌效應(yīng)。應(yīng)用sPLA2 阻斷劑于感染性疾病可能促使炎癥擴(kuò)散。

　　這也許能解釋sPLA2的阻斷劑LY333013或LY315920NA/S-5920 在過敏導(dǎo)致的支氣管收縮、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及嚴(yán)重?cái)⊙Y中無效的原因。也許只阻斷sPLA2的侵襲性效應(yīng)而不阻斷其防御性效應(yīng)的阻斷劑更值得期待。

　　關(guān)于磷脂酶A2 家族已經(jīng)明確的有以下幾點(diǎn)：⑴cPLA2a 是AA 代謝的核心調(diào)節(jié)因子，sPLA2 和iPLA2 也參與了脂質(zhì)介質(zhì)的產(chǎn)生。⑵ iPLA2 家族在細(xì)胞膜的平衡及能量代謝中起調(diào)節(jié)作用。⑶ cPLA2 和iPLA2 家族的酶在對(duì)基質(zhì)分子的磷脂水解活性方面較sPLA2 更強(qiáng)。

　?、萻PLA2在組織微環(huán)境中對(duì)細(xì)胞外磷脂質(zhì)執(zhí)行其生物功能，包括臨近細(xì)胞的胞膜、細(xì)胞脫落的微囊泡、脂蛋白和表面活性劑等非細(xì)胞來源的脂質(zhì)成分、外源性磷脂如微生物膜以及食物脂肪等。多種多樣的靶目標(biāo)膜也許能解釋為什么在每種PLA2 家族中有如此多的亞型存在。在真核生物中，PLA2 家族除了產(chǎn)生脂質(zhì)介質(zhì)外，還參與了脂質(zhì)代謝的全過程。

　　⑸ sPLA2與PLA2R結(jié)合的阻滯劑應(yīng)用的效果目前沒有定論，研究不良反應(yīng)更少，正效應(yīng)更強(qiáng)的阻滯劑是今后的研究方向。

　　三、M 型PLA2R 及抗PLA2R 抗體與特發(fā)性膜性腎病的關(guān)系

　　自Beck 等發(fā)現(xiàn)抗PLA2R 抗體是IMN 患者體內(nèi)的主要自身抗體以來，圍繞抗PLA2R 抗體是導(dǎo)致IMN 發(fā)生發(fā)展的病因還是伴發(fā)現(xiàn)象仍未有定論。

　　現(xiàn)已明確在人類足細(xì)胞上有M 型PLA2R 表達(dá)，并證明M 型PLA2R 與抗PLA2R 抗體共表達(dá)。Beck 等的研究發(fā)現(xiàn)抗PLA2R 抗體只在特發(fā)性膜性腎病中表達(dá)，而在繼發(fā)性膜性腎病及其他腎小球疾病中并不表達(dá)。

　　且發(fā)現(xiàn)隨著IMN 病情的好轉(zhuǎn)，抗PLA2R 抗體滴度降低直至消失。另有研究發(fā)現(xiàn)IMN患者中足細(xì)胞上PLA2R表達(dá)明顯增高，說明PLA2R在IMN 的發(fā)病中是有改變的，無論這改變是病因還是現(xiàn)象。

　　在一項(xiàng)前瞻性研究中，組織學(xué)診斷為MN的88例患者腎臟均表達(dá)PLA2R，其中61 例高度陽性表達(dá)，61 例中有60 例患者血清中表達(dá)抗PLA2R 抗體；另27 例患者腎臟較弱表達(dá)PLA2R，并且血清中抗PLA2R抗體為陰性，其中15例發(fā)現(xiàn)有繼發(fā)性因素，其余12 例患者沒有發(fā)現(xiàn)繼發(fā)性原因或其他腎小球抗原。

　　該研究者認(rèn)為檢測腎小球內(nèi)PLA2R 并判斷其陽性強(qiáng)度有助于提示檢測血清抗PLA2R抗體，有助于鑒別原發(fā)與繼發(fā)性MN。PLA2R 的抗體存在于70%～82%的IMN 患者中，此發(fā)現(xiàn)改變了人們對(duì)MN 的認(rèn)識(shí)。

　　PLA2R 被認(rèn)為是IMN的自身抗原有以下證據(jù)：⑴ 在腎小球上與PLA2R 結(jié)合的抗體在IMN血清中被發(fā)現(xiàn)且具有相同大小。⑵ 所有與從人類腎小球提取來的185 kDa 大小的糖蛋白反應(yīng)的血清樣本能被細(xì)胞表達(dá)的重組人類PLA2R（rPLA2R）識(shí)別。

　　⑶ 人腎小球提取的免疫沉淀物能被抗PLA2R 抗體通過Western 印跡檢測。⑷ 重組PLA2R 與腎小球來源的蛋白具有相同的減敏表位。雖然抗PLA2R 抗體在70%以上IMN 患者中被發(fā)現(xiàn)且與病情活動(dòng)及蛋白尿相關(guān)，但目前仍沒有確切的證據(jù)證明這些抗體就是致病原。

　　第一，PLA2R 相關(guān)性MN 不能通過患者的血清或IgG注入鼠類或兔子中產(chǎn)生，因?yàn)檫@些種屬在腎小球中并不表達(dá)PLA2R 抗原。

　　第二，沒有PLA2R 相關(guān)性MN 動(dòng)物模型能取代Heymann腎炎，而后者是一種值得信任的MN 動(dòng)物模型，其目標(biāo)抗原megalin 表達(dá)在足細(xì)胞表面。

　　第三，抗PLA2R 抗體偶爾在上皮下免疫復(fù)合物不含PLA2R 抗原的IMN 中發(fā)現(xiàn)，說明至少一些抗PLA2R抗體不是病因。

　　第四，雖然PLA2R相關(guān)性MN在腎臟移植物中可復(fù)發(fā)。Blosser 等報(bào)道了在一例63 歲男性IMN 患者中，腎移植后第6 天就復(fù)發(fā)蛋白尿，移植腎穿刺提示病理類型為IMN。且同時(shí)血液中抗PLA2R 抗體陽性。

　　但Debiec等觀察到有一些高滴度抗PLA2R 抗體的患者在腎移植后并沒有復(fù)發(fā)。需要進(jìn)一步的研究闡明這些抗體是如何產(chǎn)生的，這些抗體是如何影響足細(xì)胞功能的。當(dāng)然，基因遺傳易感性也應(yīng)該被列入研究之中。

　　目前一些研究也發(fā)現(xiàn)PLA2R基因多態(tài)性在IMN易感性中的可能作用。Stanescu 等統(tǒng)計(jì)了556 例IMN 白人相關(guān)資料后發(fā)現(xiàn)位于染色體6p21 上的HLA-DQA1 等位基因與IMN發(fā)病密切相關(guān)。

　　國內(nèi)也有研究發(fā)現(xiàn)中國漢族人群PLA2R rs 35771982 位點(diǎn)基因多態(tài)性可能與IMN 易感性相關(guān)，但是rs 3828323 位點(diǎn)基因多態(tài)性與IMN 卻沒有相關(guān)性。提示rs 35771982位點(diǎn)CC基因型是IMN 的危險(xiǎn)因素。

　　在細(xì)胞膜上的結(jié)構(gòu)性細(xì)胞內(nèi)吞作用再循環(huán)為足細(xì)胞及足突提供了穩(wěn)定來源的PLA2R。目前還不知道抗PLA2R 抗體是否影響足細(xì)胞上PLA2R 的正常功能，腎小球上的PLA2R 的生物功能也不清楚。

　　最近有報(bào)道PLA2R 在人纖維細(xì)胞上能加重**性細(xì)胞衰老，至少部分是因?yàn)橐鸹钚匝踝澹≧OS）產(chǎn)生及DNA損傷所致。而在敲除PLA2R 的細(xì)胞中減輕了應(yīng)激所致的衰老，細(xì)胞衰老得以被阻止。

　　雖然已被證明MN中有補(bǔ)體的參與，但是IMN 的發(fā)病機(jī)理中原發(fā)性事件幾乎與補(bǔ)體激活無關(guān)。在人類自身抗體激活事件中有許多這樣的例子。包括Grave’s 病中甲狀腺**性抗體，子癇前期引起高血壓的激活A(yù)TII受體的抗體及移植腎排異反應(yīng)等。

　　抗PLA2R抗體可能潛在的影響PLA2R 的正常功能，也許是作為假性激動(dòng)劑，也許作為受體拮抗劑。由于PLA2R 在足細(xì)胞中的作用尚未可知，現(xiàn)在回答此問題為時(shí)尚早，但在人纖維細(xì)胞中的研究提供了抗PLA2R抗體作為潛在激活劑的可能。

　　因此，有關(guān)PLA2R 及其自身抗體的許多問題仍待發(fā)現(xiàn)。內(nèi)生性PLA2R 的構(gòu)相表位是如何表達(dá)并引起自身抗體反應(yīng)的？PLA2R 及MN 易感性間聯(lián)系的分子特性是什么？

　　為什么人IMN的自身抗體是IgG4亞型為主？自身抗體與細(xì)胞原位抗原結(jié)合后是如何導(dǎo)致腎小球通透性增加的？IMN 中導(dǎo)致足細(xì)胞損傷的中間介質(zhì)是什么？IMN中操縱抗原抗體系統(tǒng)反應(yīng)的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)是什么？SMN的發(fā)病機(jī)制又是什么？

　　目前沒有關(guān)于抗PLA2R 抗體、PLA2 及M 型PLA2R 相互影響關(guān)系的足細(xì)胞病相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)。如前所述，PLA2 在體內(nèi)介導(dǎo)許多的生物功能。

　　PLA2 通常被認(rèn)為是調(diào)控脂類物質(zhì)釋放的關(guān)鍵酶。隨著sPLA2 的逐漸發(fā)現(xiàn)增多及不同的與sPLA2 結(jié)合的膜蛋白的發(fā)現(xiàn)，此類酶還起著受體的配體的作用，且他們的生物功能也不僅僅限于催化活性。

　　有學(xué)者發(fā)現(xiàn)甘油二酯（DAG），即一種內(nèi)生性PKC 激活劑在高糖環(huán)境的細(xì)胞中合成增加，可能在糖酰基化中起作用。已有研究報(bào)道激活PKC可增加cPLA2活性，可能部分是增加了cPLA2的磷酸化，cPLA2的磷酸化這一步驟是cPLA2 活化的關(guān)鍵。而DAG 增加可激活PKC 通路，從而加強(qiáng)cPLA2 活化。

　　進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，蛋白激酶C（PKCа）及蛋白相互作用C 酶1（PICK1）能與nephrin 結(jié)合。高糖誘導(dǎo)的PKCа上升導(dǎo)致nephrin、PKCа、PICK1 及β抑制蛋白2 形成復(fù)合物，導(dǎo)致足細(xì)胞損傷。在PKCа和/或PICK1 敲除的足細(xì)胞細(xì)胞中，nephrin 及β抑制蛋白2 相互作用減輕，高糖導(dǎo)致的nephrin內(nèi)吞作用消除。

　　Koya等檢測出DAG-PKC 激活可能是腎小球功能失調(diào)如GFR 增加及蛋白尿的重要細(xì)胞內(nèi)機(jī)制。在糖尿病腎病大鼠中以d-α-生育酚效應(yīng)為特征，而d-α-生育酚抑制劑可抑制DAG-PKC 信號(hào)途徑。

　　另一種假說認(rèn)為抗PLA2R 抗體導(dǎo)致ROS產(chǎn)生，繼而p53 被激活，DNA 受損，從而導(dǎo)致足細(xì)胞損傷。但只是基于成纖維細(xì)胞中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果而做出的假說，并未得到實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。

　　總之，在特發(fā)性膜性腎病中，PLA2R 及抗PLA2R 抗體在患者體內(nèi)是變化的，大多數(shù)研究結(jié)果顯示與病情改變呈正相關(guān)，但也有相反的結(jié)果報(bào)道?？筆LA2R 抗體是特發(fā)性膜性腎病的病因還是伴隨現(xiàn)象仍需繼續(xù)探討。

　　目前確切的抗PLA2R 抗體是否導(dǎo)致足細(xì)胞損傷、具體機(jī)制如何以及PLA2R 和PLA2 家族在此間所起的作用均未有令人信服的證據(jù)，還有許多的待解之謎，值得我們進(jìn)一步研究探索。