B7-H1（PD-L1）是B7家族的一個(gè)新成員， 其受體是PD-1. B7-H1與PD-1的相互作用抑制T細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子的分泌。 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)人的胃癌、急性淋巴細(xì)胞瘤等腫瘤組織中均有B7-H1的異常表達(dá)， 且腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的B7-H1在體外能介導(dǎo)抗原特異性T細(xì)胞的凋亡。然而關(guān)于結(jié)腸癌組織中B7-H1的表達(dá)及其臨床意義至今國(guó)內(nèi)未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道。 近年來(lái)， 結(jié)腸癌的發(fā)病率逐漸升高， 且我們觀察到這樣一種現(xiàn)象： 即有些分化較好、發(fā)現(xiàn)較早的結(jié)腸癌手術(shù)時(shí)卻已存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移， 甚至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在此我們運(yùn)用免疫組化方法研究了結(jié)腸癌組織中B7-H1的表達(dá)， 并結(jié)合傳統(tǒng)的臨床病理指標(biāo)， 探討其與結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院2006-10/2008-02內(nèi)鏡以及手術(shù)切除的共64例新鮮結(jié)腸癌標(biāo)本， 其中18例手術(shù)切除的標(biāo)本均取癌組織、癌旁組織（距癌組織>5 cm的正常組織）各1份， 標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)， 新鮮組織標(biāo)本立即用OCT膠包埋后入-80℃保存。 患者年齡38-71歲， 其中男43例， 女21例， 所有患者術(shù)前未接受化療和（或）放療。

    1.方法：

    將用OCT膠包埋好的組織標(biāo)本用恒冷冰凍切片機(jī)（American Optical HistoSTATMicroTOME）-20℃下連續(xù)冠狀切片， 切成5 μm厚的冰凍切片， 室溫晾干后， 入40 g/L多聚甲醛中固定， 再用PBS沖洗。 以下步驟按照Histostain-Plus Kit（晶美生物工程有限公司）說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作， 依次經(jīng)3 mL/L H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，體積分?jǐn)?shù)為100 g/L山羊血清封閉， 滴加小鼠抗人B7-H1 mAb（1∶100）， 4℃過(guò)夜。 次晨依次加抗小鼠生物素化二抗和標(biāo)記HRP鏈親和素， DAB顯色， 蘇木素復(fù)染細(xì)胞核。 以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。 每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)觀測(cè)10個(gè)高倍視野（400×）， 以細(xì)胞質(zhì)中含大量粗大棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞， 基本不含或無(wú)粗大棕黃色顆粒的細(xì)胞為陰性細(xì)胞。 結(jié)腸癌組織中著色的B7-H1陽(yáng)性細(xì)胞少于10%為B7-H1表達(dá)陰性， 大于10%為表達(dá)陽(yáng)性。

    2 結(jié)果：

    2.1 不同結(jié)腸組織中B7-H1蛋白的表達(dá) 免疫組織化學(xué)分析顯示， B7-H1蛋白在結(jié)腸癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)， 陽(yáng)性表達(dá)率為48.44%（31/64例）， 陽(yáng)性染色位于結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中， 呈淡黃色至棕黃色細(xì)顆粒， 細(xì)胞核不染色； 而B(niǎo)7-H1在結(jié)腸癌旁組織中表達(dá)較弱或者不表達(dá)，其陽(yáng)性表達(dá)率僅為22.22%（4/18例）， 兩者間有差異。

    2.2 B7-H1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 在64例結(jié)腸癌標(biāo)本中， 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組B7-H1陽(yáng)性表達(dá)25例（陽(yáng)性率為65.79%）， 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組6例（陽(yáng)性率為23.08%）有差異，而在結(jié)腸癌組織中B7-H1的表達(dá)與結(jié)腸癌的浸潤(rùn)深度、分化程度、臨床分期等無(wú)關(guān)（P >0.05, 表1）。 這表明， B7-H1的表達(dá)可能與結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

    3 討論

    腫瘤的發(fā)病機(jī)制目前尚不十分清楚， 但是腫瘤發(fā)生上的免疫逃避機(jī)制是其發(fā)生的重要機(jī)制之一。 近年來(lái)， 圍繞腫瘤細(xì)胞逃逸免疫的途徑做了多方面的研究， B7家族是這方面研究的一個(gè)熱點(diǎn)。 B7-H1是近年發(fā)現(xiàn)的B7家族的新成員之一，其對(duì)調(diào)節(jié)T細(xì)胞和B細(xì)胞反應(yīng)有很明顯的效應(yīng)。研究證實(shí)， B7-H1除了在淋巴組織表達(dá)外， 還在非淋巴組織表達(dá)， 且B7-H1在非淋巴組織上的表達(dá)可以調(diào)節(jié)外周器官中T細(xì)胞和B細(xì)胞的免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)。以往雖有研究證實(shí)， B7-H1在體外可通過(guò)其抑制性受體PD-1抑制Th1為主的免疫反應(yīng)， 從而在誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡和腫瘤免疫逃避中發(fā)揮重要作用。迄今尚未見(jiàn)B7-H1表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性的報(bào)道。 存在早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是臨床上近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的結(jié)腸癌的特點(diǎn)， 并對(duì)結(jié)腸癌患者的愈后影響很大， 我們迫切需要揭開(kāi)結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制。本研究結(jié)果表明， B7-H1蛋白在結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于其在結(jié)腸癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率， 結(jié)合以前在其他腫瘤中的報(bào)道， 提示B7-H1確實(shí)參與了結(jié)腸癌的發(fā)生。 且發(fā)現(xiàn)， B7-H1在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中的表達(dá)要比未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中含量明顯升高， 其發(fā)生機(jī)制可能與B7-H1的受體PD-1或者另外一個(gè)非PD-1受體在淋巴結(jié)中的特異性高表達(dá)有關(guān)。若要證明我們的假設(shè)， 尚需設(shè)計(jì)試驗(yàn)檢測(cè)篩查PD-1或者非PD-1受體在結(jié)腸癌患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)情況。 如果假設(shè)得到證實(shí)， 我們認(rèn)為針對(duì)B7-H1/PD-1可設(shè)計(jì)相應(yīng)的抗體從而阻斷PD-1與B7-H1的結(jié)合， 減少其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移， 又因?yàn)锽7-H1在機(jī)體外周免疫耐受中發(fā)揮重要的作用， 似乎針對(duì)PD-1的抗體在未來(lái)更具有可行性。 這些都為我們以后的研究指明了方向。