艾滋病補(bǔ)充試驗(yàn)的簡單介紹
2018-09-18 17:55
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來源：愛愛醫(yī)
作者：張鳳林
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[導(dǎo)讀] HIV檢測的初篩結(jié)果如果為陽性，按照規(guī)范的檢測流程，將進(jìn)入到HIV的補(bǔ)充試驗(yàn)，做進(jìn)一步的檢測。
HIV檢測的初篩結(jié)果如果為陽性，按照規(guī)范的檢測流程，將進(jìn)入到HIV的補(bǔ)充試驗(yàn)，做進(jìn)一步的檢測。下面就艾滋病的主要的補(bǔ)充試驗(yàn)，做一個(gè)淺顯的介紹。
一、何謂補(bǔ)充試驗(yàn)
在《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2009版）中，如篩查結(jié)果為陽性的樣本，將進(jìn)行下一步的確證試驗(yàn)，而在2015版中，國家將核酸試驗(yàn)以及特定條件下的替代檢測，和確證試驗(yàn)一起作為補(bǔ)充試驗(yàn)，其檢測結(jié)果都是可以作為判定是否感染艾滋病病毒的重要依據(jù)。
補(bǔ)充試驗(yàn)是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測方法。
補(bǔ)充試驗(yàn)一般指：抗體確證試驗(yàn)，核酸試驗(yàn)，在特定條件下的替代檢測。
抗體確證試驗(yàn)包括免疫印跡試驗(yàn)，條帶/線性免疫試驗(yàn)，這個(gè)是在日常工作中最常使用的檢測方法。
核酸試驗(yàn)主要是對一些特殊的人員使用這種方法，結(jié)合臨床，來判斷是否感染了艾滋病病毒。
替代檢測包括三種酶聯(lián)免疫試驗(yàn)、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫加快速試驗(yàn)。
二、確證試驗(yàn)
目前在實(shí)際工作中常用的確證試驗(yàn)，包括免疫印跡試驗(yàn)（WB），條帶/線性免疫試驗(yàn)（RIBA/LIA）。
1、免疫印跡試驗(yàn)WesternBlot（WB）：
WB采用間接法檢測樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV-1蛋白分離開來，然后再把這些分離的不同蛋白帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上（或PVDF膜）。將此膜切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離過的HIV抗原。待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，加至硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，使其充分接觸反應(yīng)，血清中若含有HIV抗體，就會(huì)與膜條上抗原帶相結(jié)合。加入抗人-IgG酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況,按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。
WB是目前特異性、敏感性均比較好的證實(shí)HIV感染的方法。也是國內(nèi)HIV確認(rèn)的首選方法，它是在DNA印跡術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的新型技術(shù)。據(jù)報(bào)道，WB試驗(yàn)有2％的假陽性，多見于伴有自身免疫性疾病或打過疫苗的患者。如果將EIA和WB結(jié)合起來進(jìn)行HIV特異性抗體檢測,可以將檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率提高至99％，假陽性率0.0006%。
2、條帶/線性免疫試驗(yàn)（RIBA/LIA）
RIBA/LIA采用間接法檢測樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體，試劑盒的膜條上包被有HIV-1/HIV-2不同的重組抗原片段，加入待測樣品后，其中的相應(yīng)抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)；隨后加入抗人IgG（堿性磷酸酶標(biāo)記）與HIV特異性IgG抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見的條帶,按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。
這個(gè)方法的原理和WB和相同的，只是由于膜條包被的是基因工程表達(dá)的或合成肽HIV重組抗原片段，不像是WB上的自然的滅活全病毒抗原，由于人工重組后，抗原的純度較高，減少了一些干擾物質(zhì)，所以特異性較好，不確定結(jié)果相對減少30%～60%，但同時(shí)由于只是選取了一些相對比較特異的條帶，而不是全病毒的所有條帶，所以敏感性相對要低一些，假陰性要高一些。
3、結(jié)果判斷
確認(rèn)方法的結(jié)果是要根據(jù)不同廠家的說明書來做判斷的，看出現(xiàn)不同的條帶來做判斷，其中HIV-1抗體特異帶包括：env帶：gp160/gp120、gp41；gag帶：p55、p24、p17（或p18）；pol帶：p66（或p65）、p51、p31。HIV-2抗體特異條帶包括：env帶：gp140/gp105、gp36；gag帶：p56、p26、p16；pol帶：p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2env帶也可為gp125/gp80、gp36）。
一般是需要同時(shí)符合以下2條標(biāo)準(zhǔn)可判為HIV-1抗體陽性：①至少有2條env帶（gp41和gp160/gp120）出現(xiàn)，或至少1條env帶和p24帶同時(shí)出現(xiàn)；②符合試劑盒提供的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。對于出現(xiàn)HIV-2型特異性指示帶的樣品：如果同時(shí)呈HIV-1抗體陽性反應(yīng)，報(bào)告HIV-1抗體陽性，不推薦進(jìn)一步做HIV-2抗體確證試驗(yàn)；如果同時(shí)呈HIV-1抗體不確定或陰性反應(yīng)，需用HIV-2型確證試劑再做HIV-2的抗體確證試驗(yàn)。
出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定陽性，結(jié)果為不確定。
無HIV抗體特異帶出現(xiàn)，結(jié)果可判為陰性。
以下為幾種常見試劑盒的結(jié)果判斷：
三、核酸試驗(yàn)
核酸檢測是對感染者體內(nèi)游離病毒的核酸RNA含量進(jìn)行測定。通常使用血漿作為檢測樣品，根據(jù)不同檢測要求改進(jìn)的RNA提取技術(shù)使該實(shí)驗(yàn)也可用于多種體液及組織。
核酸檢測作為補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)可用于HIV-1感染診斷，包括抗體復(fù)檢試驗(yàn)有反應(yīng)和抗體補(bǔ)充試驗(yàn)不確定樣本的判定；急性期和晚期感染者的診斷。
針對對HIV-1抗體篩查陰性、近期有流行病學(xué)史的個(gè)體,或確證結(jié)果不確定的樣本,核酸檢測可用于診斷HIV-1急性期感染。
針對HIV-1抗體篩查陽性或確證結(jié)果不確定的個(gè)體，結(jié)合流行病學(xué)史和臨床病史，核酸檢測可用于HIV-1感染診斷。艾滋病晚期患者可能出現(xiàn)HIV抗體反應(yīng)不確定，可根據(jù)HIV核酸檢測結(jié)果，結(jié)合臨床病史和CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)等情況，進(jìn)行綜合判斷，確定臨床診斷。
但核酸檢測結(jié)果低于最低檢測限并不能完全排除HIV-1感染。
1、核酸定性試驗(yàn)：
全球目前正式用于臨床診斷HIV-1急性期感染的核酸檢測試劑比較少，主要是美國FDA批準(zhǔn)的Gen-Probe公司生產(chǎn)的AptimaHIV-1RNA核酸定性檢測試劑和歐盟批準(zhǔn)的AbbottM2000HIV-1RNA/DNA定性檢測試劑。國內(nèi)生產(chǎn)的用于血漿及其血液制品篩查的核酸檢測試劑主要為Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試劑。
檢測結(jié)果顯示“有反應(yīng)”或“檢測到”，報(bào)告陽性；檢測結(jié)果顯示“無反應(yīng)”或“未檢測到”，報(bào)告陰性。核酸定性檢測值低于最低檢測限的結(jié)果，不能排除HIV-1感染，需根據(jù)流行病學(xué)史、臨床病史和實(shí)驗(yàn)室相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行綜合判斷。
2、核酸定量試驗(yàn)：
核酸定量檢測原理主要基于靶核酸擴(kuò)增RT-PCR和信號放大擴(kuò)增，目前使用的病毒載量檢測技術(shù)主要有三種：1、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)系統(tǒng)（RT-PCR）2、分支DNA信號擴(kuò)大系統(tǒng)（bDNA）3、核酸序列擴(kuò)增系統(tǒng)（NASBA），三種技術(shù)都有核酸提取、擴(kuò)增或信號放大、定量檢測三部分組成。
定量的核酸檢測可以作為HIV-1感染的確認(rèn)，但更多的是作用是監(jiān)測抗病毒藥物治療效果和監(jiān)測疾病進(jìn)展。
核酸定量檢測過程中，由于可能會(huì)受到的污染，從而導(dǎo)致低病毒檢測值的結(jié)果，所以一般是以5000CPs/ml作為判斷結(jié)果的閾值，檢測值>5000CPs/ml(或IUs/ml)，報(bào)告檢測值；檢測值≤5000CPs/ml(或IUs/ml)，需再次采樣檢測，報(bào)告檢測值，結(jié)果>5000CPs/ml(或IUs/ml)，報(bào)告檢測值，結(jié)果仍≤5000CPs/ml，則需充分結(jié)合流行病學(xué)史、臨床病史、CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和HIV-1抗體隨訪檢測結(jié)果等進(jìn)行綜合判斷。
目前國內(nèi)外均沒有商品化的HIV-2核酸檢測試劑。
四、替代檢測：
替代檢測一般在一些特定條件下使用這種檢測策略，例如高流行地區(qū)（流行率大于5%）、高危人群（如男***性戀，***人群），就是用三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)，進(jìn)行檢測，這個(gè)三種試劑均要經(jīng)過使用地區(qū)中心實(shí)驗(yàn)室的評價(jià)。這個(gè)一般適用于某些特定的專項(xiàng)調(diào)查工作，在日常的工作中基本不使用這種方法。
五、補(bǔ)充試驗(yàn)的檢測流程：
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