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細(xì)胞學(xué)特殊染色

2012-09-18 17:00 閱讀:5356 來(lái)源:愛(ài)愛(ài)醫(yī) 責(zé)任編輯:潘樂(lè)樂(lè)
[導(dǎo)讀] 一、脂肪染色: (一)蘇旦Ⅲ法 試劑配制: 蘇旦Ⅲ0.1-0.2g,70%酒精100ml 將蘇旦Ⅲ置于70%酒精中,加熱飽和,在未冷前過(guò)濾,靜置一夜。 染色步驟: 1.細(xì)胞涂片。 2.70%酒精固定1分鐘。 3.放入蘇旦Ⅲ酒精溶液中20-30分鐘。 4.70%酒精洗去多余的染料。 5.水洗

    一、脂肪染色:

    (一)蘇旦Ⅲ法

    試劑配制:
    蘇旦Ⅲ0.1-0.2g,70%酒精100ml
    將蘇旦Ⅲ置于70%酒精中,加熱飽和,在未冷前過(guò)濾,靜置一夜。

    染色步驟:
    1.細(xì)胞涂片。
    2.70%酒精固定1分鐘。
    3.放入蘇旦Ⅲ酒精溶液中20-30分鐘。
    4.70%酒精洗去多余的染料。
    5.水洗。
    6.蘇木素復(fù)染2-5分鐘。
    7.1%鹽酸酒精分化。
    8.水洗,藍(lán)化,甘油封固。

    結(jié)果:脂肪桔黃或紅色。一般用于確定胞漿內(nèi)空泡究竟是糖原,水變性還是脂滴。

    (二)蘇丹Ⅳ(猩紅)(Sudan Ⅳ)染色法:

    試劑配制:
    蘇丹Ⅳ1-2克加純酒精70ml,10%氫氧化鈉20ml,蒸餾水10ml,制成混合液,略加熱,置37℃溫箱中1小時(shí),取出冷卻后過(guò)濾,12小時(shí)后即可使用。此液5天內(nèi)失效,建議配制70%酒精飽和液。

    染色步驟:
    1.細(xì)胞涂片。
    2.70%酒精固定1分鐘。
    3.放入蘇旦Ⅳ酒精溶液中20-30分鐘。
    4.70%酒精洗去多余的染料。
    5.水洗。
    6.蘇木素復(fù)染2-5分鐘。
    7.1%鹽酸酒精分化。
    8.水洗,藍(lán)化,甘油封固。

    結(jié)果:脂肪呈猩紅色。

    (三)油紅染色法:

    試劑配制:
    油紅O 0.5g,異丙醇100ml,配成飽和液,長(zhǎng)期保存?zhèn)溆谩?br />     油紅稀釋液的配制:取油紅飽和液6毫升,加蒸餾水4毫升,靜置5-10分鐘后過(guò)濾后使用。

    染色步驟:
    1.細(xì)胞涂片。
    2.70%酒精固定1分鐘。
    3.蒸餾水洗。
    4.油紅稀釋液染10-15分鐘,避光、密封。
    5.60%乙醇鏡下分化至間質(zhì)清晰。
    6、水洗。
    7.Marry氏蘇木素復(fù)染核。
    8.水洗。
    9.甘油或甘油明膠封片。

    結(jié)果:脂肪呈鮮紅色,細(xì)胞核呈藍(lán)色,間質(zhì)無(wú)色。

    二、糖原染色

    過(guò)碘酸-Schiff(PAS)染色法

    試劑配制:
    堿性品紅1g,活性炭2g,當(dāng)量鹽酸20ml,偏重亞硫酸鈉1.5g

    Schiff試劑配制
    1.堿性品紅1g,放入200毫升蒸餾水中,煮沸,攪拌,充分溶解。
    2.冷卻至50℃時(shí)過(guò)濾,濾液中加入當(dāng)量鹽酸20毫升。
    3.加偏重亞硫酸鈉1.5g,置于暗處過(guò)夜。
    4.加活性2g,搖晃,過(guò)濾,以無(wú)色為最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。

    染色步驟
    1.細(xì)胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
    2.1%過(guò)碘酸水溶液5-10分鐘。
    3.蒸餾水洗多次。
    4.Schiff液10-15分鐘。
    5.0.5%偏重亞硫酸鈉(鉀)水溶液洗2次(1-2分鐘)
    6.流水沖洗10分鐘。
    7.蘇木素復(fù)染。(1-2分鐘)
    8.酒精脫水,二甲苯透明,樹(shù)膠封固。

    結(jié)果:糖原紅色。

    注意:1.陰性對(duì)照片用淀粉酶消化處理。
              2.糖原容易水解,取材標(biāo)本最好新鮮,不要經(jīng)過(guò)水洗。
              3.固定液用中性福爾馬林為佳。
              4.如Schiff液發(fā)紅,再加入少量偏重亞硫酸鈉,使液體顏色變清后又可使用

    三、粘液染色

    (一)阿爾辛藍(lán)過(guò)碘酸雪夫(AB-PAS)染色法

    試劑配制:
    愛(ài)先藍(lán)液:愛(ài)先藍(lán)8GX1g,蒸餾水97ml,冰醋酸3ml
    核固紅液:核固紅0.1g,硫酸鋁5g,蒸餾水97ml
    堿性品紅1g,活性炭2g,當(dāng)量鹽酸20ml,偏重亞硫酸鈉1.5g

    Schiff試劑配制
    1.堿性品紅1g,放入200ml蒸餾水中,煮沸,攪拌,充分溶解。
    2.冷卻至50℃時(shí)過(guò)濾,濾液中加入當(dāng)量鹽酸20ml。
    3.加偏重亞硫酸鈉1.5g,置于暗處過(guò)夜。
    4.加活性2g,搖晃,過(guò)濾,以無(wú)色為最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。

    染色步驟
    1.細(xì)胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
    2.蒸餾水洗
    3.3%冰醋酸浸5分鐘
    4.愛(ài)先藍(lán)液染10~20分鐘
    5.蒸餾水洗
    6.1%過(guò)碘酸水溶液5-10分鐘。
    7.蒸餾水洗多次。
    8.Schiff液10-15分鐘。
    9.自來(lái)水中浸10分鐘(經(jīng)常換水)。
    10.酒精脫水,二甲苯透明,樹(shù)膠封固。

    結(jié)果:中性粘液呈紅色,酸性粘液物質(zhì)呈藍(lán)色。中性與酸性粘液的混合物質(zhì)呈紫紅色。

    (二)Southgate胭脂紅染色

    試劑配制:
    1.Southgate貯備液:胭脂紅1g,無(wú)水酒精50ml,蒸餾水50ml升,氫氧化鋁1g,無(wú)水氯化鋁0.5g
    先將無(wú)水酒精和蒸餾水1:1混合,依次加入試劑,攪拌,水浴中煮沸3分鐘,冷至室溫過(guò)濾,并用50%酒精加至總量100ml,磨紗瓶冰箱保存。
    2.Southgate稀釋液:用前取10ml貯存液加蒸餾水40ml。

    染色步驟
    1.細(xì)胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
    2.蘇木素染5~10分鐘
    3.水洗,1%鹽酸酒精分化
    4.水洗,藍(lán)化
    5、蒸餾水洗
    6.Southgate稀釋液染30分鐘
    7.水洗
    8.95%酒精洗二次
    9.無(wú)水酒精脫水,透明,封固

    結(jié)果:酸性粘液呈紅色。

    四、淀粉樣蛋白

    (一)甲基紫法(Jurgens,1875)

    試劑配制:
    (1)1%甲基紫水溶液:甲基紫(methyl violet)1g,蒸餾水加至100ml
    (2)1%蠟酸水溶液:冰醋酸1ml,蒸餾水99ml

    操作方法:
    1.細(xì)胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
    2、蒸餾水洗
    3、1%甲基紫水溶液染3-5分鐘。
    4、水洗,在鏡下觀察。
    5、1%蠟酸水溶液分化,直至見(jiàn)淀粉樣蛋白呈紫紅色或紅色,胞核呈藍(lán)紫色。
    6、流水稍沖洗。

    用**樹(shù)膠封片。或把涂片自然晾干后,用中性樹(shù)膠封固。

    結(jié)果:淀粉樣蛋白呈紫紅色至紅色。

   注意事項(xiàng):
    1、如無(wú)甲基紫,也可用結(jié)晶紫代替,同樣可獲得異色反應(yīng)。
    2、染好后的涂片不能用酒精脫水,因?yàn)榇巳玖先苡诰凭⒓疵撋?br />     3、染好后的涂片也不宜用甘油明膠封蓋。

    (二)甲醇剛果紅法(改良的Highman)

    (1)甲醇剛果紅液:剛果紅(congo red)0.5g,甲醇80ml,甘油20ml

    (2)堿性酒精分化液:氫氧化鉀0.2g,80%酒精100ml

    操作方法:
    1.細(xì)胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
    2、蒸餾水洗
    3.甲醇剛果紅染液染10~20分鐘
    4.用堿性乙醇分化液分化數(shù)秒
    5.水洗
    6.蘇木素復(fù)染2分鐘
    7.水洗數(shù)分鐘
    8.脫水,透明,封固

    結(jié)果:淀粉樣物呈桔紅色。

    五、含鐵血黃素

    普魯士藍(lán)反應(yīng):

    試劑配制:
    1.2%亞鐵氫化鉀水溶液:亞鐵氫化鉀2g,蒸餾水100ml
    2.2%鹽酸水溶液:鹽酸2ml,蒸餾水98ml
    3.0.1%沙紅(safranine)溶液:沙紅0.1g,蒸餾水100ml

    染色步驟
    1.細(xì)胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
    2、蒸餾水洗
    3.取2%亞鐵氫化鉀水溶液和2%鹽酸水溶液等份混合,滴在涂片上,10~20分鐘
    4.蒸餾水洗
    5.核復(fù)染
    6.水洗,脫水,透明,封固

    結(jié)果:含鐵血黃素呈藍(lán)色。


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