ELISA實(shí)驗(yàn)操作所要求的條件是比較嚴(yán)格的，無論是對實(shí)驗(yàn)的硬件條件還是對實(shí)驗(yàn)的操作人員的技術(shù)要求，都是如此。下面所提到的就是一些在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)所要注意的一些問題。

    ELISA實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則

    1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過2%.可用水和電子天平進(jìn)行確定。但最好有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。

    2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。

    3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

    4、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。

    5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

    6、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

    7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。

    8、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

    9、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

    10、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。

    11、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

    12、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

    13、檢測前，要打開酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

    14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。

    15、待檢樣品要澄清，否則會(huì)影響結(jié)果。

    16、溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。

    17、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

    18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。