【DOC】臨床微生物室培養(yǎng)基手冊 - 醫(yī)學(xué)資源下載
資源作者：張琳琳1
資源分類：醫(yī)學(xué) - 檢驗(yàn)科
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上傳日期：2013-01-06 10:09:52

臨床微生物室培養(yǎng)基手冊 營養(yǎng)瓊脂（普通瓊脂） 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏湯）?? 100毫升 ????? 瓊脂（視天氣，瓊脂質(zhì)量而定） 制法：將上物加熱溶解，補(bǔ)足水，調(diào)ph至7．6，過濾分裝121℃，高壓滅菌15分鐘。 用途：作普通瓊脂平皿。 ? 血瓊脂平板（BA） 制法：取營養(yǎng)瓊脂（PH7．6），加熱使其溶解待冷至45-50℃，以滅菌操作于每100毫升營養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔血5-10毫升,輕輕搖勻，立即傾注于平板或分裝試管，制成斜面?zhèn)溆谩? 用途：1．一般棉拭子均接種此培養(yǎng)基。 ????? 2．尿液，膿液 ?????3．分離細(xì)菌標(biāo)本用。 ? 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 （肉膏湯BB） 成份：蛋白胨?10克?????? 牛肉膏??? 5克???? ????? 氯化鈉?? 5克??????? 水?????? 1000毫升 制法：將以上各物稱好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，過濾分瓶，121℃高壓滅菌，20分鐘備用。 用途：1 作耐藥試驗(yàn)，增菌用分裝小管。 ????? 2 作普通瓊脂斜面。 ? 血液培養(yǎng)基（大管肉湯培養(yǎng)基） 成份：1?新鮮牛肉浸液??? 1000毫升??? ????? 2?PABA（對氨基苯甲酸［相當(dāng)于10mg/毫升］）?? 1g%?1毫升 ????? 3?MgSO4?? [相當(dāng)于0．493/100毫升]?????????? 49．3%?1毫升 ????? 4?枸椽酸鈉???????????????????????????????????? 0．3g 制法：1?將1號，4號混合液，2號，3號液分裝高壓滅菌。 ????? 2?取滅菌1，4號混合液用無菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行無菌試驗(yàn)三天方可使用。 用途：作血，骨髓培養(yǎng)用。 ? 腸道桿菌培養(yǎng)基（伊紅美蘭瓊脂） 成份：?蛋白胨 ????10克??????????? 乳糖????? 10克 ??????? 氯化鈉???? 5克???????????? 瓊脂????? 25（22）克 ??????? 水???????? 1000毫升??????? 2%伊紅溶液20毫升 ??????? 0．5%美蘭溶液?? 20毫升 制法：將蛋白胨，氯化鈉瓊脂稱好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4過濾，補(bǔ)足失水，加入2%伊紅溶液20毫升，0．5%美蘭溶液20毫升，（115℃高壓20分鐘），冷卻至50℃左右傾注平板，凝固后存冰箱備用。（高壓以后方可再加乳糖） ? 用途：用作分離沙門氏，志賀氏菌屬，也作菌群調(diào)查。 羅文斯坦培養(yǎng)基 成份：磷酸二氫鉀?? ????2．4克??????? ??????硫酸鎂?? 0．24克 ????? 枸椽酸鈉???????? 0．6克????????????? 天門冬素?3．6克 ????? 純甘油（丙三醇） 12毫升?? ???????????水??????600毫升 ????? 馬鈴薯粉????? ???30克???????? ??????雞蛋??? 1000毫升（約3公斤） ????? 2%孔雀綠水溶液?20毫升?????? 制法：1?除雞蛋外（還有孔雀綠）?？蓪⑵渌锲贩Q好，放入大三角瓶包扎好，高壓滅菌。 ????? 2?雞蛋用75%酒精泡30分鐘，滅菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的滅菌三角燒瓶內(nèi)充分將雞蛋搖散。 ????? 3?將各成份按比例配好，分裝每管約5毫升。 ????? 4?間歇滅菌第一次90℃1小時，第二次80℃半小時，第三次80℃半小時（或放85℃烤箱內(nèi)連續(xù)二次）。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)： 1?滅菌試驗(yàn)合格。 ??? ???????2?接種結(jié)核桿菌要求兩星期生長良好。 用途：作結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)用。 ? 結(jié)核半固體培養(yǎng)基 成份：磷酸氫二鈉??? ??19克??????????? ???硫酸鎂????? 0．6克 ????? 磷酸二氫鉀??? ??2．5克?????????? ???天門冬素??? 5克 ????? 1%孔雀綠???? ??1．5克?????????? ???甘油???????? 20毫升 ????? 吐溫80（10%）?5毫升????????? ???水????????? 1000毫升 ????? 枸椽酸鈉??????? 2．5克????????? ????動物血清??? 100毫升 ????? 瓊脂????????? ??1．5克（80小時用甲醇去脂） ????? 1%孔雀綠???? ??0．78毫升??????? ??吐溫80（10%） 5毫升 ????? 加動物血清??? ??100毫升 制法： 1?除血清外將上述藥品均稱好，放入煮沸溶解，調(diào)PH7。2 ?????? 2?分管（每管約10毫升）包扎好，高壓，121℃半小時滅菌。 ?????? 3?待冷后無菌法加無菌血清（綿羊血或兔血）每管約1毫升備用。 ?????? 4?去除瓊脂方法：取瓊脂若干或于三角燒瓶中加甲醇于瓊脂1毫升用塞密封，放37℃溫浴80小時，每天搖動一次，冷卻后到時取出用濾紙過濾，待瓊脂自然冷卻后備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：1無菌實(shí)驗(yàn)合格。 ????????? 2瓊脂硬度合適而清亮。 ????????? 3接種標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核桿菌用，強(qiáng)度合適即可用。 用途：培養(yǎng)結(jié)核桿菌用。 ? 亞碲酸鉀血瓊脂平板 成份：瓊脂基礎(chǔ)???? 100毫升???????? 10%葡萄糖????? 2毫升 ????? 1%亞碲酸鉀?4．5毫升??????? ??綿羊血?? ??????10毫升 制法：1將瓊脂基礎(chǔ)溶解好，加入羊血。 ????? 2馬上加熱使成咖啡色后，稍冷再加入10%葡萄糖2毫升與1%亞碲酸4．5毫升混合后倒入無菌平板，? ??????? 凝固后存冰箱備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：接種白喉?xiàng)U菌生長良好，其它革蘭氏陰性菌均抑制生長。 用途：供培養(yǎng)及鑒別白喉?xiàng)U菌用。?????????? ?????????? ?????????????????????????? 米培養(yǎng)基 成份：白米?? ??????20克?????????????? 水????? 1000毫升 ????? 瓊脂???????? 20克????????????? 吐溫80?? 10毫升 制法：1將20克米加水200毫升煮沸45分鐘，煮時將容器蓋好。 ????? 2用紗布過濾，只要米湯，不要飯，加水至1000毫升。 ????? 3加瓊脂20克，吐溫-80 10毫升煮溶，分裝中型管（每管約3毫升），包扎好，高壓，121℃半小時，消毒備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：1滅菌。 ????????? 2要求清亮。 ????????? 3接種白色念珠菌17-24小時生長良好，并產(chǎn)生厚膜孢子。 用途：培養(yǎng)白色念珠菌用。 ? 蛋白胨水培養(yǎng)基 成份：蛋白胨???? 1克????????? 氯化鈉?????? 0．5克 ????? 水加至??? 100毫升??????? PH調(diào)至????? 7．8 制法：把以上各物稱好溶于水，調(diào)節(jié)PH7．6分裝消毒備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：1?放置37℃無菌生長。 ????????? 2?接種大腸桿菌24小時生長良好。 ????????? 3?可作中國蘭平板基礎(chǔ)液。 ????????? 可作靛基質(zhì)基礎(chǔ)液（作此試驗(yàn)需要色氨酸蛋白胨）。 ? 血培養(yǎng)基 成份：蛋白胨???? 10克?????????? 牛肉膏????? 5克 ????? 氯化鈉???? 5克??????????? 葡萄糖????? 3克 ????? 枸椽酸鈉?? 3克??????????? MgSO4。7H2O?20毫升 ????? 0．5%PABA?10毫升?????? 酵母浸液?? 10毫升?? 0．2克（2%過濾） ????? *酚紅0．4%?? 6毫升???????? 水????? 1000毫升 ?????? 瓊脂?????? 0．5克?????? *：作大BB，小BB時，不要加酚紅和瓊脂。 制法：1。除PABA、硫酸鎂、酚紅外均稱好煮化調(diào)PH7．4 ????? 2。調(diào)好PH后再加酚紅。 ????? 3。硫酸鎂、PABA另外無菌再加入（亞細(xì)，小BB）??? ? 沙氏培養(yǎng)基 成份：蛋白胨????? 1克???????????????????????? 水?????? 100毫升 ????? 瓊脂??????? 1．5克（瓊脂粉1克%）????? 葡萄糖或麥芽糖?? 4克 制法：1將上述物質(zhì)稱好，放入水中煮沸溶解（不必調(diào)PH即有5左右）分中號試管（約4毫升）包扎，高壓115℃20分鐘。 ????? 2 趁熱斜好，凝固備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：1無菌試驗(yàn)合格。 ????????? 2接種霉菌比在其它培養(yǎng)基上生長良好，其它菌生長不好。 ?用途：作分離培養(yǎng)霉菌用。 注意：1?接種臨床新鮮標(biāo)本可先加1-2滴70%酒精讓干后再接種于含12．5%氯霉素沙氏斜面培養(yǎng)基上。?? ???? 2?也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麥芽糖。 ? 肉渣培養(yǎng)基 成份：牛肉渣???????????? 牛肉浸液（牛肉膏） 制法：將做牛肉浸液的牛肉渣，裝入試管，高約3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏湯（PH7．6）約5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高約0．5厘米（不加也可），121℃高壓滅菌20-30分鐘后保存于冰箱內(nèi)備用。 用途：用于厭氧菌培養(yǎng)。 注意：如無肉渣也可用牛、羊血等代替，將血塊先放入水內(nèi)煮沸，取出成小塊，血塊在加熱后搖勻成碎顆粒狀。 ? 單糖發(fā)酵管培養(yǎng)基（半固體） 成份： PH7．6-7．8蛋白胨水???? 1000毫升（0．3克/100毫升） ?????? 1．2%酚紅液????????? 0．4毫升 ?????? 瓊脂????????????????? 0．4 - 0．5克 ?????? 10%糖或醇??????????? 10毫升 制備：把蛋白胨水，瓊脂加熱溶解，然后加1．2%酚紅液0．4毫升，10%糖10毫升，混勻，分裝試管，每管約2-3毫升，經(jīng)115℃高壓滅菌20分鐘后，分置于試管架上，貼上各類糖或醇類標(biāo)簽備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌發(fā)酵糖類或醇而產(chǎn)生酸，能使培養(yǎng)基PH改變，指示劑由紅變黃色，如因發(fā)酵產(chǎn)生氣體則 ????????? 半固體內(nèi)產(chǎn)生氣泡，如有動力則半固體由清亮變混濁。 ? 明膠培養(yǎng)基 成份：肉浸液??????? 1000毫升（牛肉浸膏5克） ????? 明膠????????? 12克 制法： ?? 100毫升肉浸液中，加入明膠12克，隔水加熱煮化，校正PH7．2，分裝小號試管，用阿諾氏間歇滅菌80℃30分鐘，連續(xù)3日，或者108℃高壓20分鐘，冷卻，貯存?zhèn)溆谩? 堿性蛋白胨水 成份： ?? 蛋白胨????? 20克?????? ??????氯化鈉????? 5克 ?? 硝酸鉀?????? 0．1克????????? 結(jié)晶碳酸鈉（NaclCO3．12H2O）?0．2克 ?? 水?????? ???1000毫升 ?????????????????????????????????????? 制法：將蛋白胨，Nacl，硝酸鉀，結(jié)晶碳酸鈉稱好，溶于1000DW中，校正PH8．4分裝試管，121℃高壓 ????? 滅菌15分鐘后備用。 用途：用于霍亂弧菌培養(yǎng)。 ????????????????????????????????????? 葡萄糖蛋白胨水（M。V用） 成份：蛋白胨??????? 5克???????????? 葡萄糖???????? 5克 ????? K2HPO4 ??????5克????????????? 水????????? 1000毫升 制法：將上述稱好溶解分裝試管，調(diào)PH7．4高壓滅菌115℃滅菌20分鐘，或者葡萄糖加熱煮沸后再倒試管 標(biāo)準(zhǔn)：滅菌試驗(yàn)合格。 ????? 接種大腸桿菌VP陰性，M陽性；接種產(chǎn)氣桿菌

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